彩虹預(yù)染超低分子量蛋白質(zhì)Marker II（3-40 kD）
Rainbow Prestained Ultra Low Molecular Weight
Protein Marker II（3-40 kD）
●產(chǎn)品編號及規(guī)格：
RTD6145-01 10 T（50 μl）
RTD6145-02 50 T（250 μl）
● 儲存條件：
-20℃保存，有效期12個月
● 產(chǎn)品簡介：
彩虹預(yù)染超低分子量蛋白質(zhì)Marker II可以直接觀察蛋白電泳及清晰判斷Western Blotting的轉(zhuǎn)膜效果。本產(chǎn)品由9種多肽和蛋白質(zhì)組成，分子量大小為 3 kD，4.2 kD，6.5 kD，10 kD（綠色），15 kD，20 kD，25 kD，30 kD，40 kD（紅色） (注：蛋白大小已在18%Tricine-SDS-PAGE中用非預(yù)染蛋白Marker標(biāo)定過。)。
● 使用說明：
第一次收到該產(chǎn)品，常溫融化后，徹底混勻，離心快甩將溶液完全收集到管底。
一. 制膠：
I 配制分離膠
1．按照表一將不同體積的雙蒸水、40% PAA（19:1）、凝膠緩沖液和乙二醇加入到小燒杯中混合。
2．加入10%APS和TEMED，立即混勻5-10秒，以使溶液充分混勻。
3．在凝膠模具中迅速灌入適量分離膠溶液，然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1
cm的無水乙醇，使凝膠表面保持平整。
4．靜置15-30分鐘，待分離膠和乙醇層之間出現(xiàn)一個清晰的界面表示凝膠已聚合。
表一 （一塊1 mm mini膠用量）
|
|
分離膠
|
濃縮膠
|
|
|
18％T, 5%C /5 ml
|
5％T, 3.3%C/2 ml
|
|
40% PAA（19:1）
|
2.25 ml
|
/
|
|
40% PAA (29:1)
|
/
|
0.25 ml
|
|
4×凝膠緩沖液
|
1.25 ml
|
0.5 ml
|
|
乙二醇（電泳級）
|
1.5 ml
|
/
|
|
ddH2O
|
/
|
1.25ml
|
|
10％APS
|
50 μl
|
20 μl
|
|
TEMED
|
5 μl
|
2 μl
|
II 配制濃縮膠
去除覆蓋在分離膠上的乙醇層，用濾紙將殘留乙醇吸去。
1．按照表一將不同體積的雙蒸水、40%PAA（29:1）和凝膠緩沖液加入到小燒杯中混合。
2．加入10%過硫酸銨和TEMED，立即混勻5-10秒，以使溶液充分混勻。
3．將梳子插入凝膠內(nèi)，避免產(chǎn)生氣泡。
4．靜置30-60分鐘裝待凝膠聚合
二. 電泳：
1. 取Marker樣品，充分混勻后備用。不要加熱處理。
2. 電泳前，將10×陽極緩沖液（Cat No：AB080）和10×陰極緩沖液（Cat No：CB010）用蒸餾水稀釋成1×緩沖液備用。將電泳槽的外槽加入1×陽極緩沖液，內(nèi)槽加入1×陰極緩沖液，輕柔拔出梳子，將Marker或蛋白樣品（已經(jīng)過2×Tricine上樣緩沖液[Cat No：TP050]處理）加入點樣孔，參考下表進行電泳，至每條帶都清晰可見時停止電泳。整個電泳過程大約需要2-3個小時。
表二 多肽電泳條件
|
恒電壓
|
150V
|
|
起始電流
|
60-75mA/板膠
|
|
結(jié)束電流
|
15-25mA/板膠
|
|
電泳時間
|
2.5-3小時
|
三. 染色
根據(jù)常規(guī)實驗步驟，用配方6和7（表三）進行染色和觀察。如果使用配方6進行染色時效果不好或考慮其毒性，請選擇本公司的考馬斯亮藍蛋白膠快速染色液（Cat No：RTD6201），該產(chǎn)品除具有染色快，無毒，靈敏性高等特點外，還能對小肽在染色中起到固定作用，不至于小肽在染色和脫色中從凝膠中脫離，是常規(guī)染色液的理想替代品。
注：預(yù)染蛋白Marker由于嵌合了染料，在不同的凝膠系統(tǒng)中遷移率會有不同，因此只能用來粗略估計目的蛋白的大小。如要精確確定蛋白的大小，請在同一凝膠系統(tǒng)中用非預(yù)染蛋白Marker來標(biāo)定預(yù)染蛋白Marker的分子量。
表三 小分子蛋白質(zhì)SDS-PAGE電泳試劑配制
|
1. 40%PAA（29:1）（配制濃縮膠）
貨號： AC2914
丙稀酰胺 38.67g
甲叉雙丙稀酰胺 1.33g
用ddH2O溶解后定容至100
ml，過濾后使用。
貯存：4℃
|
2. 40% PAA（19:1） （配制分離膠）
貨號：AC1914
丙稀酰胺 38 g
甲叉雙丙稀酰胺 2 g
用ddH2O溶解后定容至100
ml，過濾后使用。
貯存：4℃
|
3. 4×凝膠緩沖液（配制凝膠用）
貨號：GB010
[3 M Tris; 0.4% SDS; pH8.45]
Tris堿 36.3 g；ddH2O 80ml
0.4
g SDS或4 ml 10％ SDS
用HCl調(diào)pH值至8.45；用ddH2O定容至100
ml
貯存：4℃
|
|
4. 10×陽極緩沖液（下槽緩沖液）
貨號：AB080
[2
M Tris pH8.9]
Tris堿 121.1g；ddH2O 400ml；用HCl調(diào)pH值至8.9；用ddH2O定容至500ml
貯存：4℃
注：使用前稀釋成1×陽極緩沖液使用。
|
5. 10×陰極緩沖液（上槽緩沖液）
貨號：CB010
[1
M Tris; 1 M Tricine ;1% SDS; pH 8.3]
Tris堿 121.14g；Tricine 179.2g；SDS 10 g
用ddH2O溶解，定容至1000
ml(不用調(diào)pH)。
貯存：4℃
注：使用前稀釋成1×陰極緩沖液使用
|
6. 染色液
貨號：RTD6203
冰醋酸 100 ml
考馬斯亮藍G-250 0.25 g
水 900 ml
|
|
7. 脫色液
貨號：RTD6204
冰醋酸 100 ml
水 900 ml
|
8. 2×Tricine蛋白樣品上樣緩沖液（10ml）
貨號：TP050
1ml1MTris-HCl pH6.8；2.4
ml 甘油；0.8 g SDS；0.31
g DTT（或者400 μl β-巰基乙醇）；2
mg 考馬斯亮藍G-250；用滅菌水定容至10ml
混勻分裝-20℃貯存?zhèn)溆?/span>
|
|
多肽電泳配套試劑
使用RTD6145 彩虹預(yù)染超低分子量Marker
II（3-40 kD）產(chǎn)品發(fā)表部分文章列表：
1. [2022 IF=13.6] Inactivation mechanism of cold plasma combined with 222 nm ultraviolet for
spike protein and its application in disinfecting of SARS-CoV-2
Author: Xiaowei
Sheng, Jin Wang, Luling Zhao, Wenjing Yan, Jing Qian, Zhaobin Wang, Jianhao
Zhang, Vijaya Raghavan
Marker: RTD6145
彩虹預(yù)染超低分子量Marker
II（3-40kD）
Journal: Journal of Hazardous Materials 465 (2024) 133458
Institution: Nanjing
Agricultural University
Paper link： https://doi.org/10.1016/j.jhazmat.2024.133458