20×快速蛋白電泳緩沖液（變性電泳，溶液型）
● 產(chǎn)品組成：
|
貨號(hào)
|
名稱
|
規(guī)格
|
|
TG200
|
20×快速蛋白電泳緩沖液（變性電泳，溶液型）
|
500
ml
|
|
|
說(shuō)明書(shū)
|
一份
|
● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
本產(chǎn)品為20×濃縮型快速蛋白電泳緩沖液，由Tris-Glycine電泳緩沖液優(yōu)化而來(lái)，適用于Tris-Glycine體系（Laemmli體系）蛋白凝膠電泳。與傳統(tǒng)的Tris-Glycine電泳緩沖液相比，使用本產(chǎn)品電泳時(shí)無(wú)需根據(jù)分離膠和濃縮膠調(diào)整不同電壓，可全程200-250 V恒壓電泳，約20-35 min可完成電泳（低于10%膠濃度），大大節(jié)約時(shí)間，并且對(duì)小分子蛋白分離效果更好，可使預(yù)染蛋白Marker中10
kD與15 kD條帶分離并清晰可見(jiàn)（凝膠濃度8%以上），達(dá)到快速高效分離蛋白的作用。本產(chǎn)品含有SDS，不適用于非變性電泳。本產(chǎn)品為20×濃縮液，使用前需要用水稀釋為1×后使用，無(wú)需調(diào)節(jié)pH值，pH 8.0-8.5。
● 貯存和效期：
4-8度貯存，常溫運(yùn)輸，有效期1年。
● 用前必讀：
1. 和傳統(tǒng)的SDS-PAGE電泳液（Laemmli系統(tǒng)，1×Tris-Glycine-SDS電泳緩沖液，25 mM Tris，192 mM Glycine，0.1%
SDS，pH8.3）相比，本快速電泳液可以大幅加快電泳速度，縮短電泳時(shí)間。推薦200-250 V恒壓電泳，低于10%膠濃度凝膠通常20-35分鐘就能完成電泳。
2.
使用快速電泳緩沖液?jiǎn)伟迥z電泳時(shí)，穩(wěn)壓200
V，起始電流在45-60 mA，如果同時(shí)電泳2板膠或者4板膠，電流會(huì)升高，請(qǐng)根據(jù)需求采取降溫措施。
3. 對(duì)于低濃度例如6%、8%或10%的固定濃度膠，本快速電泳液比傳統(tǒng)電泳液具有更好的分離效果，可以達(dá)到類似梯度膠的分離效果，更適合小分子量蛋白電泳，蛋白Marker
10 kD條帶清晰分離。產(chǎn)生相同分離效果時(shí)，使用本快速電泳液可使用濃度更低的分離膠，例如使用傳統(tǒng)電泳液對(duì)10%、分離膠進(jìn)行電泳時(shí)，使用本快速電泳液時(shí)對(duì)應(yīng)的分離膠只需要8%即可，電泳效果基本一致，并且由于膠濃度較低，可以增強(qiáng)轉(zhuǎn)膜效率，提高WB檢測(cè)靈敏度。
4. 本快速電泳液含有SDS，適用于變性膠蛋白電泳，不適用于非變性電泳（Native-PAGE）。
5.
該快速電泳緩沖液建議用于經(jīng)典Laemmli系統(tǒng)配制的凝膠，經(jīng)測(cè)試可以達(dá)到最優(yōu)的分離效果。對(duì)于其他電泳系統(tǒng)如Bis-Tris系統(tǒng)，HEPES系統(tǒng)，Tris-醋酸系統(tǒng)，Tricine系統(tǒng)等，需要經(jīng)過(guò)驗(yàn)證測(cè)試后使用。
6. 本快速電泳液可以適當(dāng)回收，回收后的電泳液可以作為外槽電泳液再使用1-2次。如果希望獲得最佳的電泳效果，請(qǐng)勿使用回收的電泳液。內(nèi)槽緩沖液每次都需要使用新鮮配制的電泳緩沖液。
● 使用說(shuō)明：
1. 即用型1×快速蛋白電泳緩沖液配制：
|
|
1×快速蛋白電泳緩沖液配制量
|
|
|
500 ml
|
1 L
|
|
20×緩沖液
|
25 ml
|
50 ml
|
|
超純水
|
475 ml
|
950 ml
|
注：配制好的1×電泳緩沖液建議4℃貯存，可保存1-2周。如果出現(xiàn)變色或沉淀請(qǐng)重新配制新鮮的電泳液。
2. 電泳條件：
全程恒壓電泳，電壓建議為200-250
V。一般情況下，恒壓250 V電泳時(shí)，對(duì)于濃度為10%的分離膠僅需~22分鐘即可完成電泳。如果需獲得更加平整和銳利的條帶，可以把電壓調(diào)整為150 V，此時(shí)電泳時(shí)間需要適當(dāng)延長(zhǎng)。
|
電泳電壓與電泳時(shí)間（min）對(duì)照表
|
|
|
Laemmli凝膠濃度
|
|
|
6%
|
8%膠
|
10%膠
|
12%
|
15%
|
|
200 V
|
~30
|
~30
|
~33
|
~40
|
~48
|
|
250 V
|
~18
|
~18
|
~22
|
~30
|
~35
|
● 不同蛋白大小選擇不同的分離膠濃度，參考下表：
|
Laemmli系統(tǒng)
SDS-PAGE分離膠濃度
|
最佳分離范圍（kD）
1×快速蛋白電泳緩沖液
|
最佳分離范圍（kD）
1×Tris-Glycine-SDS電泳緩沖液
|
|
6%
|
15-300
|
50-350
|
|
8%
|
10-250
|
35-300
|
|
10%
|
5-150
|
20-150
|
|
12%
|
3-100
|
15-100
|
|
15%
|
低于60
|
10-80
|
● 實(shí)驗(yàn)示例：
SDS-PAGE快速電泳液（TG190）用于各種濃度分離膠的電泳效果圖
上圖為各種濃度分離膠使用快速電泳液的效果圖，
下圖為相同凝膠使用傳統(tǒng)的Tris-甘氨酸電泳液（TG120）的效果圖。
6%~15%的凝膠使用SDS-PAGE凝膠配制試劑盒配制（RTD6116）
樣品：1，2 使用5×雙色蛋白上樣緩沖液 (變性，還原）（PL090）配制；
3 三色預(yù)染寬分子量蛋白Marker II（10-250 kD）(RTD6149)，上樣5 μl；
4 雙色預(yù)染寬分子量蛋白Marker（10-170KD）（RTD6105），上樣5 μl；
電泳條件：恒壓200 V