Bradford蛋白濃度測定試劑盒（去垢劑兼容型）
Bradford Protein Assay Kit（Detergent Compatible）
|
產(chǎn)品編號
|
產(chǎn)品名稱
|
包裝
|
|
RTP7104
|
Bradford蛋白濃度測定試劑盒（去垢劑兼容型）
|
800次
|
● 試劑盒內(nèi)容及保存：
|
貨號
|
產(chǎn)品名稱
|
包裝
|
貯存方式
|
|
RTP7104-01
|
考馬斯亮藍G-250染色液（去垢劑兼容型）
|
250 ml
|
4℃
|
|
BSA-01
|
牛血清白蛋白(BSA)標準溶液（5
mg/ml）
|
2×1 ml
|
-20℃
|
|
RT0280-02
|
PBS溶液
|
10 ml
|
4℃
|
|
|
說明書
|
1份
|
|
● 儲存條件和效期：
考馬斯亮藍G-250染色液（去垢劑兼容型）4℃貯存；牛血清白蛋白標準溶液-20℃貯存。PBS溶液4℃貯存。本試劑盒有效期1年。試劑盒常溫運輸。
● 產(chǎn)品簡介：
Bradford蛋白濃度測定試劑盒(去垢劑兼容型)其原理是考馬斯亮藍G-250在酸性條件下和蛋白質(zhì)結(jié)合，使得染料最大吸收峰從465nm變?yōu)?95nm，在一定的線性范圍內(nèi)，反應(yīng)液595nm處吸光度的變化量與反應(yīng)蛋白量成正比，測定595nm處吸光度的增加即可進行蛋白定量。該試劑盒進行了優(yōu)化，能兼容一系列常見去垢劑和一定濃度的還原劑，并且檢測數(shù)據(jù)有很好的線性關(guān)系。本試劑盒的性能不僅優(yōu)于常規(guī)的Bradford法，和BCA法相比也更加快速便捷。
蛋白研究中許多蛋白樣品都是含有去垢劑，因此常規(guī)Bradford法的使用受到了很大的限制，通常只能使用可以兼容去垢劑但檢測比較耗時的BCA法。但BCA法無法兼容還原劑。當?shù)鞍讟悠分型瑫r含有一定濃度的去垢劑和還原劑時，常規(guī)的Bradford法和BCA法都無法使用，而本試劑盒仍然是可以檢測的。試劑盒兼容蛋白提取的多種裂解液，包括 Western及IP細胞裂解液、RIPA裂解液、NP-40裂解液、SDS裂解液等。
按照每個10
μl樣品使用300 μl染色染色液計算，試劑盒可以至少檢測800個樣品。
● 產(chǎn)品特點：
1.
檢測速度快，10-20個樣品只需不足10分鐘即可完成。
2. 靈敏度高，檢測濃度下限可達25
μg/ml （測定濃度范圍在50-1000 μg/ml內(nèi)有較好的線性關(guān)系），最小檢測蛋白量可達0.5
μg。
3. 該試劑盒測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學物質(zhì)的影響。樣品中β-巰基乙醇的濃度可高達1
M，DTT的濃度可高達5
mM。同時，此方法測定蛋白濃度可以兼容受高濃度的去垢劑影響，可以適用于膜蛋白樣品的濃度測定。蛋白樣品中SDS濃度低于1%，Triton
X-100濃度低于1%，Tween
20, 60, 80濃度低于1%，NP-40濃度低于1%都可以定量。
● 操作方法：
用前注意事項：
蛋白標準請全部溶解混勻后再使用。
需可檢測560-610 nm之間波長的酶標儀一臺，最佳檢測波長為595
nm。并需96孔微孔板。
微孔板測定程序：（最佳工作范圍50-1000 μg/ml）
1． G-250染液在使用前應(yīng)平衡溫度至常溫并溫和顛倒混勻。
2． 1
mg/ml蛋白標準品配制：常溫完全溶解蛋白標準品，取20
μl 5 mg/ml BSA蛋白標準溶液，加入80 μl PBS溶液，使其終濃度為1 mg/ml。
3． 按照下表配制BSA標準測定溶液：
|
編號
|
0
|
1
|
2
|
3
|
4
|
5
|
6
|
7
|
8
|
|
|
1 mg/ml BSA 標準溶液 μl
|
|
BSA標準溶液 μl
|
0
|
0.5
|
1.5
|
2.5
|
5.0
|
7.5
|
10
|
15
|
20
|
|
PBS 溶液 μl
|
20
|
19.5
|
18.5
|
17.5
|
15
|
12.5
|
10
|
5
|
0
|
|
BSA終濃度 μg/ml
|
0
|
25
|
75
|
125
|
250
|
350
|
500
|
750
|
1000
|
|
總體積 μl
|
20 μl
|
4． 取10 μl不同濃度蛋白標準加到96孔微孔板的蛋白標準孔中。
5． 將適當體積的待測樣品加入到微孔板中，如果樣品不足10
μl，用PBS補足到10
μl；
6． 向微孔板中加入300 μl G-250染色液，混勻，常溫放置 3-5 min。
7． 用酶標儀測定A595波長的吸光度，以不含BSA
的樣品的光吸收值作為空白對照。可以立即測定吸光度，也可以在30分鐘內(nèi)測定，30分鐘內(nèi)檢測數(shù)據(jù)無顯著變化。對于不含去垢劑和含有某些去垢劑的情況，在2小時內(nèi)檢測數(shù)據(jù)無顯著變化；對于含有某些特定去垢劑的情況，在2小時內(nèi)檢測數(shù)據(jù)會有一定的變化，但仍然會呈現(xiàn)較好的線性關(guān)系。
8． 以A595為縱坐標，BSA含量為橫坐標，繪制標準曲線，計算樣品中的蛋白濃度。如果所得到的蛋白濃度不在標準曲線范圍內(nèi)，請稀釋樣品后重新測定。
注：如使用分光光度計測定，可根據(jù)實際需要擴大溶液體積，保證蛋白標準溶液和蛋白樣品與
G-250染液的體積比為 10:300，例如，如果需要 1.5 ml，可取蛋白樣品 50 μl，G-250染液試劑 1.5 ml。
試劑盒對常見去垢劑的兼容性