寬分子量非變性電泳蛋白質(zhì)Marker
III（21-1000 kD）
Broad MW Native
Electrophoresis Protein Marker III（21-1000 kD）
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貨號
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名稱
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規(guī)格
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RTD6104
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寬分子量非變性電泳蛋白質(zhì)Marker III（21-1000
kD）
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20次（100
μl）
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●儲存、運(yùn)輸及效期：
-20℃保存；濕冰運(yùn)輸；有效期為12個月。
●技術(shù)規(guī)格：
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技術(shù)規(guī)格
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主條帶數(shù)量
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8條
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貯存緩沖液
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50 mM Tris-HCl pH7.5，15%甘油，穩(wěn)定劑，溴酚藍(lán)
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濃度
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0.2-0.4 μg/μl
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上樣前處理
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溶化混勻后直接上樣，不要加熱處理
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推薦凝膠體系
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8%或4-15%Tris-甘氨酸非變性凝膠
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推薦上樣體積
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5 μl（1mm厚度10齒梳子）
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推薦染色方法
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非預(yù)染Marker，電泳時不可見條帶，電泳后需要考馬斯亮藍(lán)染色可以觀察條帶
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不適用于變性電泳
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為非變性Marker，不適用于變性電泳
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● 產(chǎn)品簡介：
本產(chǎn)品有6種蛋白組成，分子量范圍為21-1000 kD，經(jīng)過非變性電泳后，用考馬斯亮藍(lán)染色后可以得到8條主帶。
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蛋白名稱
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分子量(kD)
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蛋白來源
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pI
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說明
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PR1
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~1000
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equine
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N/A
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非變性下約1000 kD
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Ferritin
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~440
~880
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equine
spleen
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N/A
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非變性下440
kD，880
kD
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RC2
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~200
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重組蛋白
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6.7
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單體蛋白分子量為75
kD，在Tris-甘氨酸非變性下表現(xiàn)為分子量~200
kD
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RC1
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~66
~132
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重組蛋白
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4.7
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單體蛋白分子量為~66 kD，在Tris-甘氨酸非變性下表現(xiàn)為單體（分子量~66 kD）和二聚體（分子量~132 kD）
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Ovalbumin
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~45
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egg
white
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5.2
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球蛋白，分子量為45 kD，非變性條件下大于45 kD會出現(xiàn)電荷異構(gòu)體（charge
isomer，分子量~50 kD）
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Trypsin
Inhibitor
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~21
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Soybean
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4.5
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非變性下分子量~21
kD
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● 使用說明：
1. 取出產(chǎn)品后，常溫溶化后，徹底混勻，上樣電泳。
注：上樣量根據(jù)膠的厚度和梳子的寬度確定。一般說來，1.0厚度10齒梳子加樣孔上樣5 μl，1.0厚度15齒梳子加樣孔上樣量2.5 μl，其他規(guī)格梳子請適當(dāng)調(diào)整上樣量。
2. 該產(chǎn)品不含蛋白凝膠制備試劑，您可以選擇非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒（貨號：
RTD6130或RTD6135）。如自備試劑，經(jīng)典Laemmli系統(tǒng)中把制膠溶液、電泳緩沖液和上樣緩沖液中的SDS和還原劑（DTT或β-巰基乙醇）全部去除即可進(jìn)行非變性電泳。
3. 電泳條件：
建議使用8%，10%非變性膠或者4-15%梯度非變性膠（貨號：RTD6117-0415）進(jìn)行電泳。
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恒電壓
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120 V
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起始電流
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27-35
mA/板膠
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結(jié)束電流
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7-10
mA/板膠
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電泳時間
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50-60
min
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4. 電泳結(jié)束后，考馬斯亮藍(lán)染色，觀察結(jié)果。
注：使用銀染染色時，由于靈敏度高于考馬斯亮藍(lán)染色方法，需要適當(dāng)降低Marker上樣量，一般稀釋50倍后上樣。
● 注意事項：
1. 該產(chǎn)品僅適用于酸性蛋白非變性電泳，不適用于變性電泳和堿性蛋白非變性電泳。非變性蛋白電泳條件下，不能精確判斷蛋白的分子量大小，更多是作為相對參照。因為在非變性條件下，蛋白的電荷，空間結(jié)構(gòu)，物化性質(zhì)等都對蛋白的遷移有影響，所以非變性電泳的蛋白分子量需謹(jǐn)慎解讀并結(jié)合其他方法（如SEC-HPLC）驗證。
2. 非變性蛋白電泳Marker由于要保持蛋白的天然結(jié)構(gòu)，都沒有偶聯(lián)染料，在電泳時基本都看不到條帶；但是RTD6104中的440
kD由于天然蛋白中含有鐵離子，使得電泳后在膠上可見淡黃色，凝膠轉(zhuǎn)膜后，膜上也可以看到黃色的440 kDa條帶，可以大體判斷Marker轉(zhuǎn)膜的效果。
3. 非變性蛋白Marker轉(zhuǎn)膜后可以用麗春紅染色液（貨號：RTD6301）染膜，可以看到Marker條帶，順便可以檢測轉(zhuǎn)膜效率，然而要注意的是麗春紅染色靈敏度比較低，可能不能完全看到完整的Marker條帶。
4. 推薦使用8%（貨號：RTD6130），4-15%的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳（貨號：RTD6135）或者3-12%和4-16% RealPAGE Native BN/CN預(yù)制膠（貨號：RTD6139）。其他濃度并非不適用，因為非變性蛋白Marker遷移率不僅受分子量影響，還受其他因素影響，所以在不同濃度的凝膠中，分子量標(biāo)記的遷移位置會變化，主帶的電荷異構(gòu)體的表觀分子量也會變化。如，132和200 kD條帶在10% Tris-甘氨酸非變性膠中幾乎重疊，不能有效分離（實驗示例3），而在4-15%Tris-甘氨酸非變性中可以有效分離（實驗示例1）。
實驗示例：
1 4-15%Tris-甘氨酸非變性
2 4-16% Blue Native gel
3. 10%Tris-甘氨酸非變性膠
