Anti-Lamin
B1抗體（兔單抗）
Anti-Lamin B1 Antibody（Monoclonal Antibody from Rabbit）
|
產(chǎn)品編號(hào)
|
產(chǎn)品名稱
|
規(guī)格
|
|
RGL1150
|
Anti-Lamin B1抗體（兔單抗）
|
20 μl
|
● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介
Lamin B1是由LMNB1基因編碼一種核纖層蛋白質(zhì)。在動(dòng)物細(xì)胞中，3種基因編碼了至少7種核纖層蛋白。LMNA基因通過可變剪接編碼A型和C型核纖層蛋白，而LMNB1和LMNB2分別編碼核纖層蛋白B1和B2。B型核纖層蛋白存在于每個(gè)細(xì)胞。A型核纖層蛋白在原腸胚形成后表達(dá)，C型核纖層蛋白的表達(dá)是組織特異性的。在核纖層蛋白中，核纖層蛋白B1往往被用作核被膜內(nèi)參。核纖層蛋白B1在物種間是高度保守的，分子量為~68kD。
|
來源
|
用途及稀釋比例
|
抗體類型
|
Lamin B1分子量
|
|
Rabbit
|
WB 1:1000-5000
IHC 1:200-1000
IF 1:200-1000
|
單克隆抗體
|
~68 kD
|
注：WB, Western blot; IHC, Immunohistochemistry;
IF, Immunofluorescence
● 貯存形式：
穩(wěn)定溶液，1 mg/ml 抗體溶于PBS，50%甘油，pH7.2。
● 保存及運(yùn)輸條件：
-20℃保存，一年有效；避免反復(fù)凍融；濕冰運(yùn)輸。
● 使用說明：
1. Western Blot雜交(ECL顯色)：1:1000-5000稀釋，常溫孵育1-2 h或4℃過夜。
2. 免疫熒光（IF）和免疫組化（IHC）：1:200-1000稀釋。
● 實(shí)驗(yàn)示例：
1 變性檢測(cè)：
總蛋白提取：5×106 K562細(xì)胞，400 g 離心收集，去上清，沉淀中加入200 μl RIPA（加2 μl 100 mM PMSF），冰上裂解5分鐘，4℃ 16000 g 15 分鐘，上清即為總蛋白（TP）。
電泳：4-15%RealPAGE Tris-Glycine預(yù)制膠（貨號(hào)：RTD6117-0415）；1×TGS 200V 55min
轉(zhuǎn)膜：0.45μm PVDF膜，1×RealBlot快速轉(zhuǎn)膜液 400 mA 40 min，電壓變化85-68 V
封閉：Western快速封閉液（貨號(hào)：WR5020）
RT封閉 10 min
一抗： Anti-Lamin B1抗體（兔單抗）（貨號(hào)：RGL1150） 1：3000，RT 60min
Anti-GAPDH抗體（兔單抗）（貨號(hào)：RGA1150） 1：10000，RT 60min
二抗：HRP標(biāo)記羊抗兔gG（貨號(hào)：HGR1020）1：5000
RT 60min
ECL發(fā)光：RealECL發(fā)光液（貨號(hào)：EC2520）；化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)（貨號(hào)：RT523）曝光1秒。
2 非變性檢測(cè)：
實(shí)驗(yàn)程序：
樣品提?。篕562細(xì)胞 1×107細(xì)胞，400 g 離心3 min收集，1×PBS清洗2次，細(xì)胞沉淀中加入0.6 ml
非變性裂解液（貨號(hào)：RL1080），輕柔懸浮細(xì)胞，4度冰浴15min，間歇混勻，
4度 16000 g 15 min，收集上清。
電泳上樣樣品制備：BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定濃度（貨號(hào)：RTP7102），
樣品加入4×BN/CN-PAGE蛋白上樣緩沖液（貨號(hào)：PL114 ），調(diào)配為0.3 μg/μl上樣液，
上樣40 μl（12 μg）。
樣品1：RL1080提取樣品，加終濃度0.125% G-250（5% G-250染料，貨號(hào)：BC260）；
樣品2：RL1080提取樣品，不加G-250；
樣品3：RL1080提取樣品使用離心式去垢劑去除柱（貨號(hào)：DD0550）去除去垢劑，
樣品4：柱式動(dòng)物胞漿蛋白提取試劑盒(細(xì)胞樣品,非變性提取,不含去垢劑)（貨號(hào):RTD8106）提取樣品；
凝膠制備：Blue/Clear 非變性凝膠電泳試劑盒（手灌膠）（貨號(hào)：RTD6140）
制備10% 厚度1.5 mm凝膠；
電泳：使用10×BN電泳緩沖液（貨號(hào)：BC500P）。開始電泳用1×藍(lán)色BN電泳緩沖液（0.02%G250），
恒壓200 V 51min后，換無色1×BN 電泳緩沖液,電泳時(shí)間共104 min
凝膠預(yù)處理：凝膠浸泡于1×BN轉(zhuǎn)膜緩沖液+0.1%SDS中 搖床慢搖10 min
濕轉(zhuǎn)法轉(zhuǎn)膜：用10×BN轉(zhuǎn)膜緩沖液（貨號(hào)：BC600P）配制1×BN轉(zhuǎn)膜緩沖液+20%甲醇，用0.45 μm
PVDF，恒流200 mA（電壓變化114-83 V） 2小時(shí)，未冰浴（緩沖液水溫36度）。膜用無水甲醇去除藍(lán)色
封閉：Western快速封閉液（貨號(hào)：WR5020）快速封閉 10 min
GAPDH檢測(cè)：GAPDH 兔單抗（貨號(hào)：RGA1150） 1:10000 過夜孵育；
羊抗兔IgG-HRP 1:5000（貨號(hào)：HGR1020） RT 1h，ECL 1秒
抗體清除：PVDF膜用Western一抗二抗去除液（弱堿，溫和型）（貨號(hào)：WS1200） 清除30min，
Western快速封閉液（貨號(hào)：WR5020）快速封閉 10min。
Lamin B1檢測(cè)：Anti-Lamin B1抗體（兔單抗）（貨號(hào)：RGL1150）1：3000 RT 1h，
羊抗兔IgG-HRP 1:5000（貨號(hào)：HGR1020） RT 1h，ECL 8秒