10×酸性蛋白Native PAGE轉(zhuǎn)膜緩沖液
|
產(chǎn)品編號
|
產(chǎn)品名稱
|
規(guī)格
|
|
AP5015
|
10×酸性蛋白Native
PAGE轉(zhuǎn)膜緩沖液（粉末）
|
1升
|
簡介：
10×酸性蛋白Native PAGE轉(zhuǎn)膜緩沖液適用于酸性蛋白電泳后凝膠上非變性酸性蛋白的轉(zhuǎn)膜。本轉(zhuǎn)膜液配制便捷，稀釋后無需調(diào)節(jié)pH值，pH約為9.2。緩沖液主要成分為Tris，甘氨酸和微量SDS。該緩沖液最終可配成10升即用型1×緩沖液（要補加甲醇）。
保存條件：
粉末裝常溫保存，兩年有效。
配制方法：
將10×轉(zhuǎn)膜緩沖液粉末全部溶解于1升超純水中，徹底溶解，即配成10×轉(zhuǎn)膜緩沖液。根據(jù)下表配制成1×即用型轉(zhuǎn)膜緩沖液
|
|
1×即用型轉(zhuǎn)膜緩沖液
|
|
|
500 ml
|
1 L
|
|
10×轉(zhuǎn)膜緩沖液
|
50
ml
|
100
ml
|
|
超純水
|
400
ml
|
800
ml
|
|
無水甲醇
|
50
ml
|
100
ml
|
|
|
不用調(diào)節(jié)pH
|
使用方法：
1. 酸性蛋白非變性電泳：
各種蛋白質(zhì)分子由于所含的堿性氨基酸和酸性氨基酸的數(shù)目不同，因而有各自的等電點。凡堿性氨基酸含量較多的蛋白質(zhì)稱為堿性蛋白，等電點偏堿性，pI＞7，如組蛋白、精蛋白等。反之，凡酸性氨基酸含量較多的蛋白質(zhì)，等電點就偏酸性，pI＜7，自然界中大多數(shù)蛋白都是酸性蛋白。分離堿性蛋白時候，要利用低 pH 凝膠系統(tǒng)，分離酸性蛋白時候，要利用高 pH 凝膠系統(tǒng)。酸性蛋白通常在非變性凝膠電泳中采用的 pH 是 8.8的緩沖系統(tǒng)，蛋白會帶負(fù)電荷，蛋白會相陽極移動；而堿性蛋白通常電泳是在微酸性環(huán)境下進行，蛋白帶正電荷，這時候需要將陰極和陽極倒置才可以電泳。酸性蛋白電泳可參考使用非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒（貨號:RTD6130）。
2. 轉(zhuǎn)膜：
① 轉(zhuǎn)膜方法：酸性蛋白在非變性狀態(tài)的轉(zhuǎn)膜建議用濕轉(zhuǎn)法。
② 三明治結(jié)構(gòu)：由于酸性蛋白pI＜7 在堿性轉(zhuǎn)膜緩沖液中帶負(fù)電荷，轉(zhuǎn)膜三明治結(jié)構(gòu)與傳統(tǒng)轉(zhuǎn)膜相同，即根據(jù)“黑膠白膜”制作三明治，即膜置于轉(zhuǎn)膜夾芯正極一側(cè)，凝膠置于轉(zhuǎn)膜夾芯負(fù)極一側(cè)，這樣凝膠上帶負(fù)電荷的酸性蛋白才能轉(zhuǎn)移到膜上。
酸性蛋白轉(zhuǎn)膜三明治制作：
負(fù)極（電轉(zhuǎn)夾黑色面）-海綿墊-3至5層濾紙-凝膠-膜-3至5層濾紙-海綿墊-正極（電轉(zhuǎn)夾白色面）
③ 膜的選擇：膜可以用PVDF膜或NC膜，根據(jù)蛋白大小選擇膜的孔徑。一般說來，大于20kD蛋白選擇0.45μm孔徑，低于20kD選擇0.22μm孔徑。PVDF膜使用前要用無水甲醇潤濕活化，NC膜只需用轉(zhuǎn)膜緩沖液潤濕就可以。
④ 轉(zhuǎn)膜條件：
由于在非變性條件下，不同酸性蛋白的空間結(jié)構(gòu)，聚合狀態(tài)，電荷數(shù)量都有不同，以下轉(zhuǎn)膜條件僅供參考，客戶針對自己的目的蛋白，最好經(jīng)過1-2次預(yù)實驗后，確定最佳的轉(zhuǎn)膜條件。
|
蛋白大小
|
穩(wěn)流
|
建議時間
|
降溫措施
|
|
低于70kD
|
180 mA
|
2 小時
|
需要
|
|
高于70kD
|
300 mA
|
1.5 小時
|
需要
|